El servicio de PCR digital proporciona el equipamiento e infraestructura necesaria para la detección y cuantificación absoluta de ácidos nucleicos mediante la técnica analítica de PCR digital (dPCR), con gran precisión y sensibilidad.

Para ello, este servicio está basado en una plataforma dPCR: QuantStudio™ 3D Digital PCR System (QS3D CORE SYST; CHIPS- MMX V2), que funciona mediante la partición de una muestra de ADN o ADNc en numerosas reacciones de PCR individuales en paralelo, conteniendo algunas de estas reacciones la molécula objetivo (positivo), mientras que otras no la contienen (negativo). Permite que una sola molécula se pueda amplificar como mínimo un millón de veces, y para ello, se utiliza la química TaqMan® con sondas marcadas con fluorocromos. Tras el análisis de PCR, la fracción de reacciones negativas es utilizada para generar un recuento absoluto del número de moléculas de la muestra, sin necesidad de recurrir a estándares ni controles endógenos.

El uso de un chip nanofluídico proporciona un mecanismo para ejecutar miles de reacciones de PCR en paralelo. Cada uno de los pocillos está cargado con una mezcla de muestra, master mix y reactivos de ensayo TaqMan®, y se analiza individualmente para detectar la presencia (positivo) o ausencia (negativo) de una señal de criterio de valoración. Para representar los pocillos que pueden haber recibido más de una molécula de la secuencia objetivo, se aplica un factor de corrección mediante el modelo de Poisson.

Ventajas de la PCR digital:

• No es necesario depender de referencias o estándares.
• Determinación absoluta y precisa del número de copias.
• La eficiencia de la reacción influye menos en el resultado que en la qPCR.
• Alta tolerancia a los inhibidores y capacidad para analizar mezclas complejas.
• Detección lineal de pequeños cambios de expresión.

Sectores de interés:

• Laboratorios de genética y del sector sanitario, incluidos hospitales.
• Laboratorios del sector agroalimentario.
• Laboratorios de análisis medio ambientales.