Laboratorio de Fisiología

Este laboratorio, orientado hacia la fisiología y fisiopatología gastrointestinal, presta el apoyo científico-técnico en la investigación de los mecanismos reguladores implicados en la función intestinal y en los procesos inflamatorios del intestino, dependientes de la interacción con su microbioma.

Actualmente, se llevan a cabo estudios en relación con los mecanismos fisiopatológicos responsables de las alteraciones motoras gastrointestinales inducidas en procesos infecciosos. Para ello, el laboratorio cuenta con capacidad para realizar técnicas inmunológicas, registro de la actividad eléctrica de células musculares intestinales, y estudios de la motilidad gastrointestinal in vivo (electromiografía) e in vitro (baño de órganos).

También se realizan estudios en relación con la regulación fisiopatológica del sistema serotoninérgico y su aplicación en patologías inflamatorias crónicas intestinales. Para ello, el laboratorio cuenta con capacidad para desarrollar técnicas de expresión funcional del transporte de 5-HT en el cultivo celular, determinaciones cinéticas, estudios de inhibición y cálculo de la dosis-respuesta y determinación de la expresión del ARMm (PCR cuantitativa a tiempo real RT-qPCR mediante cebadores específicos), y expresión proteíca (Western-Blotting e inmunohistoquímica).

En la línea de investigación de los mecanismos de interacción de la microbiota con el intestino del hospedador, a nivel laboratorial se realiza un modelo de disbiosis intestinal producido por antibióticos en ratones tratados. Al respecto, el laboratorio cuenta con capacidad para llevar a cabo técnicas de PCR, electroforesis en gel desnaturalizante en gradiente (DGGE),  secuenciación, histología e inmunofluorescencia.

Con tres áreas de trabajo definidas, el laboratorio cuenta con el siguiente equipamiento:

Unidad de registro y análisis de la motilidad gastrointestinal:

• Equipos de registro y análisis de la motilidad gastrointestinal in vivo (electromiografía), in vitro (baño de órganos) y en células aisladas: amplificadores de alta ganancia, filtros pasa-altos, conversor analógico digital, software de adquisición y análisis de señales fisiológicas (AcqKnowledge^® v3.8.)

Equipamiento para cultivos celulares:

• Cabina de flujo laminar vertical: Telstar^TM AV-100.
• Incubador de CO₂: Heraeus^® BB16.
• Microscopio luz invertida: Olympus^® CK2. Olympus Corporation

Equipo para la expresión funcional de proteínas transportadoras y para técnicas de expresión molecular de proteínas:

• Baños de incubación: WNB10. Memmert, Digiterm 100. Marca: Selecta
• Agitador mecedor de plataforma: Duomax 1030. Heidolph Instruments GmbH & Co. KG
• Equipo de western blotting: Mini-PROTEAN® Tetra Cell. Bio-Rad
• Sistema de transferencia húmeda de proteínas. Mini Trans-Blot® Cell. Bio-Rad
• Sonicador homogenizador por ultrasonidos. HD 2200. BANDELIN electronic GmbH & Co.
• RT-PCR. Modelo: DNA Engine^® Peltier Thermal Cycler. Bio-Rad.
• Captación y análisis digital de imágenes. BioDoc-it^® Imaging System. UVP

RT-PCR a tiempo real:

• Sistema de PCR a tiempo real: StepOne Plus^TM Real-Time PCR System. Applied Biosystems. ThermoFisher Scientific

Equipamiento para técnicas de secuenciación masiva:

• Secuenciador de tercera generación: MinION. Oxford Nanopore Technologies
• Homogenizador de muestras blandas y duras para extracción de DNA, RNA o proteínas: Precellys^®Cryolis. Bertin Instruments

Equipos comunes generales:

• Microcentrífuga
• Congeladores -80ºC y -20ºC.
• Autoclave